IgA 腎病變(IgAN)為世界上常見之原發性腎絲球腎炎,但現今診斷 IgAN仍以臨床表徵及採取侵入性手術。在此,我們開發新穎之分析方法,利用凝集素 RussiaSea-001(來自海洋中淡菜之一種成份),針對 N-乙酰基-2-脫氧-2-氨基-半乳糖 (GalNAc/Gal) 具有特異之親和結合能力,成功研發出新穎之 Gd-IgA1偵測法。 1.利用RussiaSea-001結合ELISA分析IgA腎病變的血清 首先利用神經氨酸酶(neuraminidase)製備脫唾液酸化之免疫球蛋白A1 (Sd-IgA1)並進一步以β 半乳糖苷酶(β-galactosidase)製備Gd-IgA1。在此驗證了RussiaSea-001與半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)有顯著的結合力(圖1),接著,我們從健康對照組與IgAN患者中選擇了10對血清樣品,後者以KM-55試劑組檢測出陽性且Gd-IgA1表現量高。如圖1所示,使用RussiaSea-001進行的ELISA在IgAN患者中顯示出高水平的Gd-IgA1。我們進一步確定了從IgAN患者中隨機收集的血清樣品中Gd-IgA1表現量(28個IgAN與22個正常對照)。 RussiaSea-001結合的ELISA再次顯示這些患者的Gd-IgA1顯著增加。 2.結合RussianSea-001親和層析和Western blot分析IgA腎病變患者血清 如圖2所示,此方法顯示IgAN患者中Gd-IgA1明顯較高。我們進一步確定了從IgAN患者中隨機收集血清樣品中Gd-IgA1的表現量(28個IgAN與22個正常對照)。該測定顯示這些患者的Gd-IgA1表現量顯著增加(圖2B-E)。 3.利用新穎修改型試管結合RussianSea-001分析IgA腎病變患者血清 我們從健康對照組與IgAN患者中選擇了10對血清樣品,後者以KM-55試劑組檢測出陽性且Gd-IgA1表現量高者。如圖3所示,新穎修改型RussiaSea-001試管分析在IgAN患者中顯示出高表現量的Gd-IgA1。我們進一步確定了從IgAN患者中隨機收集的血清樣本中的Gd-IgA1表現量(36個IgAN與31個正常對照)。這種穎修改型試管分析再次顯示這些患者的Gd-IgA1表現量顯著增加(圖3)。 |